Tev Protease अनुप्रयोग: फार्मास्युटिकल उद्योग

रिकॉम्बिनेंट TEV Protease, etch virus (TEV) द्वारा एन्कोड किए गए छोटे परमाणु समावेशन a (NiA) प्रोटीन के उत्प्रेरक डोमेन की अत्यधिक शुद्ध तैयारी है। प्रोटीज का जैविक कार्य ईच वायरस बायोजेनेसिस के दौरान वायरल पॉलीप्रोटीन को एकल प्रोटीन में प्रोटियोलाइज करना है। इसकी अनुक्रम विशिष्टता कारक Xa, थ्रोम्बिन की तुलना में कहीं अधिक कठोर है। TEV प्रोटीज डाउनस्ट्रीम फ्यूजन प्रोटीन क्लीवेज के लिए एक बहुत ही उपयोगी टूल एंजाइम है जो सामान्य रूप E-Xaa-Xaa-Y -xAAA-Q-P1ACA A (G/S) के हेप्टापेप्टाइड सर्वसम्मति अनुक्रम को पहचानता है, जिसमें Q और P1A A के बीच दरार होती है। सबसे अधिक इस्तेमाल किया जाने वाला अनुक्रम ENLYFQG है। P1A स्थिति में कई अलग-अलग छोटे अमीनो एसिड सहन किए जाते हैं, जिससे लक्ष्य जीन को एन-टर्मिनल फ़्यूज़न से या तो देशी एन-टर्मिनस के साथ या केवल एक अमीनो एसिड प्रतिस्थापन के साथ छोड़ा जा सकता है। व्यापक तापमान सीमा पर बेहतर स्थिरता और उच्च विशिष्ट गतिविधि के लिए इसे बेहतर ढंग से इंजीनियर और शुद्ध किया गया है। एंजाइम पुनः संयोजक ई. कोली में निर्मित होता है और 10,000u/mg की विशिष्टता के साथ उच्च समरूपता के लिए शुद्ध किया जाता है। दरार के लिए इष्टतम तापमान 30aCa A है, हालांकि, एंजाइम का उपयोग 4acA A से कम तापमान पर किया जा सकता है। शुद्धता: एसडीएस-पेज विश्लेषण द्वारा 95% से अधिक। गतिविधि: एक यूनिट को एंजाइम की मात्रा के रूप में परिभाषित किया जाता है जो 1x रिएक्शन बफर में 4aCa A पर 12~16 घंटे में 5A A g फ्यूजन प्रोटीन के 95% को साफ कर देगा। अनुशंसित एंजाइम पाचन की स्थिति फ्यूजन प्रोटीन 0.1mg रिकॉम्बिनेंट टीईवी प्रोटीज 20 यू 10xबफर 10 तापमान: 4 कुल आयतन:10 समय एक घंटा: 12~16 10x रिएक्शन बफर 500 मिमी ट्रिस-एचसीएल, पीएच 8.0 5 एमएम ईडीटीए 1% ट्विन-20 (v/v) 10 एमएम डीटीटी स्थिरता: रिपोर्ट किए गए डेटा के बाद से दो साल तक -20acA A पर स्थिर। सन्दर्भ कपस्ट आरबी, टीएसीआर जे, कोपलैंड टीडी, वॉ डीएस। टेक वायरस प्रोटीज की P1 की विशिष्टता, बायोकेम बायोफिज़ रेस कम्यून 2002 जून 28; 294 (5): 949-55।